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本儀器基于電穿孔原理，通過在短時間內對樣品施加高壓脈沖，使細胞膜形成瞬時微孔，從而允許外源 DNA、RNA、蛋白質或納米顆粒進入細胞內部。165-2661 型在結構、控制、數據記錄等方面具有高精度、可重復性和綜合安全保障。
實驗步驟可細分為：樣品準備、儀器設置、電擊執行、樣品回收與培養、結果評估。每一環節均有其關鍵要點和注意事項。
將儀器安放于平整、干燥、無強振動、無直射陽光的實驗臺上。
接通電源，確認 AC 220 V ± 10%，50/60 Hz，且插座已接地。
開機后儀器進行自檢，確認蓋鎖檢測、溫度傳感、自動放電系統、風扇散熱系統均正常。
檢查電擊槽（ShockPod）內部是否干燥、無殘液、無沉淀物。電擊杯是否清潔、干燥、無裂紋或氧化。
準備電擊杯、緩沖液、樣品、外源分子、刻度移液器等。確保所有耗材無鹽、無離子強度過高。
預設培養環境。若用哺乳動物細胞，預熱培養基至 37 ℃；若用細菌或酵母，準備適宜轉化/培養平板。
從周期培養或適宜狀態下取細胞：細菌為對數生長期，酵母或真核細胞亦處于對數期。
離心、洗滌多次以去除培養基中高鹽成分，使用低離子緩沖液或純水重懸。
樣品濃度調整至推薦范圍：例如細菌約 1×10? cells/mL，真核細胞約 1×10?–1×10? cells/mL。
外源分子（DNA、RNA、蛋白）應純度高、無鹽，并緩慢加入樣品中，輕柔混勻。
將混合樣品置于冰上或低溫條件（通常 0-4 ℃）預冷 5-10 分鐘，以減少熱效應。
移液至電擊杯，體積一般為電擊杯最大容積的 60-80%。避免液面高于電極上緣或產生氣泡。
在主界面按“MENU（菜單）”鍵進入設置模塊。
選擇“Manual Setup（手動設置）”或“Preset Protocol（預設方案）”視實驗需要。
以下是常規需設定的參數：
電壓 (Voltage)：例如 400-700 V（真核細胞）、1200-1600 V（酵母）、2000-2500 V（細菌）等。
電容 (Capacitance)：例如 25-500 μF 細菌體系、小電容；500-1000 μF 真核或植物體系。
電阻 (Resistance)：根據樣品電導率設定，一般 50-600 Ω。如儀器具自動匹配 “Auto-R” 選項可啟用。
波形類型 (Waveform)：選擇指數衰減波（Exponential）或方波（Square）模式，依據細胞類型與目的。
脈沖次數 (Pulse Count)：可設 1-10 次。敏感細胞可用多脈沖，耐受細胞可用單脈沖。
間隔時間 (Pulse Interval)：多次脈沖間隔建議 0.5-2 s，視樣品耐受性而定。
保存參數方案：完成設定后按 “SAVE” 鍵保存當前參數組，以便日后調用。
檢查設定的電壓是否在儀器允許范圍（10-3500 V）內。
檢查電容與電阻組合是否合理，確保時間常數（τ = R × C）在適用范圍。
確認電擊杯間隙、樣品體積、電導率等與設置參數匹配。
若使用梯度模式（Gradient Mode），設定起始電壓、步長、次數。
將預冷樣品轉移到電擊杯中，確認無氣泡。
蓋上杯蓋并插入 ShockPod。
蓋鎖應聽“咔噠”聲提示閉合成功，儀器顯示 “LID CLOSED – SAFE TO RUN”。
按 “PULSE” 鍵進入充電狀態，儀器提示 “READY TO PULSE”。
按 “ENTER” 鍵執行放電。
放電過程中，儀器自動顯示實際輸出電壓、時間常數、能量釋放比例等數據。
放電結束后，屏幕提示 “COMPLETE”，系統進入冷卻或退出狀態。
放電結束后 5-10 秒再打開蓋子，避免電弧殘留。
將樣品立即轉入預熱培養基或平板中，輕輕混勻。
細菌樣品可立即置于適溫培養，哺乳動物細胞轉至 37 ℃ CO? 培養箱恢復。
記錄本次放電參數、樣品類型、體積、濃度、結果編號等，用于后續分析。
放電后立即加入適量預溫培養液（如 SOC、YPD 等），輕輕混勻。
在 37 ℃（細菌）或 30 ℃（酵母）溫育約 30-60 分鐘以允許細胞修復。
將適量樣品鋪平至選擇性培養平板，培養至菌落形成。
放電后轉入含血清完全培養基，置于 37 ℃、5% CO? 條件培養。
靜置 1-2 小時后可換培養基并繼續培養至預定時間點。
后續可進行熒光標記、Western blot、流式檢測等分析。
轉入含甘露醇保護劑或適用于原生質體的培養液中恢復。
置于 25-28 ℃ 溫和光照條件下，時間約 1-2 小時。
后續用于轉基因表達、熒光觀察或下游分析。
儀器自動保存：實際輸出電壓、電阻、時間常數、能量釋放比例、波形圖。
可通過 USB 導出 CSV 或 TXT 文件，用于統計分析。
轉化/轉染效率：細菌以 CFU/μg DNA 表示；真核細胞以陽性細胞占比表示。
細胞存活率：通過臺盼藍、PI 染色或流式計數評估。
表達水平：如熒光蛋白表達、qPCR 或 Western blot 檢測。
重復性與穩定性：三次以上實驗數據應波動較小（例如效率變化 <±15%）。
整理不同參數組合與實驗結果對應關系。
繪制轉化效率-電壓、時間常數-存活率等曲線。
根據趨勢調整參數，進入下一輪優化。
實驗結束后關閉電源。
等待 10 秒自動放電后再打開蓋子。
用無水乙醇擦拭電擊杯、電極及 ShockPod 內部，確保干燥。
清理通風口和風扇濾網，保持散熱通暢。
定期（每月／每季度）校驗輸出電壓、時間常數與波形穩定性。
電擊前必須確認蓋鎖閉合，嚴禁操作中觸摸電極。
樣品緩沖液不得含高鹽或氣泡，避免電弧發生。
實驗過程中應佩戴絕緣手套。若出現閃光、冒煙、異常聲音，立即斷電。
實驗區域應遠離液體、金屬器具或未經接地的物體。
操作后樣品應及時回收并對廢液做高壓滅菌處理。
檢查儀器與環境；
準備樣品（濃度、電導率、體積）；
設定儀器參數（電壓、電容、電阻、波形、脈沖次數）；
裝載電擊杯，檢測蓋鎖狀態；
執行放電；
樣品轉移至培養條件；
記錄數據與結果；
清理儀器，維護設備。
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